jueves, 3 de agosto de 2017

BIOTECNOLOGIA: PROPAGACION IN VITRO.

MICROPROPAGACIÓN DE ORNAMENTALES A TRAVÉS DE  TEJIDOS
Los avances de la biotecnología forestal como el cultivo ’in vitro’ permiten la regeneración de plantas completas y obtener miles de copias idénticas de un árbol con excelentes características, de manera controlada, eficiente y ocupando menos espacio. Mediante selección in Vitro se puede obtener resistencia a enfermedades, tolerancia a herbicidas o tolerancia a estreses ambientales.
Mediante la aplicación de un conjunto de técnicas posibilita el cultivo de partes separadas de una planta, como es el caso de células, tejidos y otros, denominados explantes, en un medio de cultivo de condiciones asépticas mayormente en un frasco de vidrio y que bajo la influencia de sustancias constituyentes de este medio de cultivo y varias factores ambientales se inducen al crecimiento y desarrollo de una planta completa.
La micropropagación nos permite clonar individuos garantizando el mantenimiento de las cualidades seleccionadas, para más adelante probar su adaptación en el departamento de Piura.
Esquema de técnica de micro propagación de ornamentales in Vitro:

OBJETIVOS:
Rectángulo redondeado: ü	Obtener plantas sana (violetas - begonias) para su adaptación y posterior  comercialización en nuestra región.
ü	Desarrollar con los alumnos responsables del proyecto tecnologías eficientes para la micropropagación de ornamentales.
ü	Obtener plantas libres de patógenos.



JUSTIFICACIÓN:
Las plantas ornamentales son aquellas que se cultivan y posteriormente se comercializan y por consiguiente obtener beneficios económicos.
El propósito de una planta ornamental es  la de mostrar su belleza  y por eso debe tener un excelente cuidado. En nuestra región existen y sobre todo en la sierra piurana existen diversas variedades de plantas ornamentales, pero debido a la sobre explotación de las mismas se vienen extinguiendo variedades únicas en nuestra región.
En tal sentido la multiplicación in vitro de éstas es sin duda alguna una herramienta para  poder preservar y conservar estas variedades y al mismo tiempo la de introducir variedades mediante cultivadas inicialmente in vitro para luego adaptarlas al ambiente y posteriormente a campo definitivo donde continuarán con su adaptación.
La importancia de este tipo de plantas se ha incrementado con el desarrollo económico de la sociedad y el incremento de las áreas ajardinadas en las ciudades y con el uso de plantas de exterior e interior por los particulares.

DISEÑO DEL LABORATORIO:
EL LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA, debe contar con las siguientes áreas básicas;
·         Sala de lavado y esterilización de materiales.
·         Sala de siembra.
·         Sala de incubación.

Los ambientes deben estar separados y contar con filtros de aire.
En el laboratorio de CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES propiamente dicho se encuentran los siguientes tipos de equipos:
1.      Cabinas de flujo laminar (áreas de trabajo y de contención estéril).
2.      Incubadoras: baños termostatizados, incubadores de CO2.
3.      Instrumentos ópticos de observación del cultivo: microscopio invertido de contraste de fases, de fluorescencia, estereoscopios.
4.      congeladores
5.      equipo de esterilización: autoclave, equipos de filtración.

CONSIDERACIONES IMPORTANTES:

RECOMENDACIONES DE ASEPSIA:
La característica principal que define al laboratorio de cultivo celular es el mantenimiento de la asepsia. La tasa de crecimiento de las células en cultivo es muy inferior al de los contaminantes habituales: hongos, levaduras, bacterias y micoplasmas, y por ello para el mantenimiento del cultivo será vital evitar la aparición en éste de cualquier microorganismo indeseado.
El área de trabajo para realizar cultivos debe instalarse en una parte del laboratorio tranquila, alejada de las vias de paso y a ser posible dedicada exclusivamente al cultivo de células. La solución ideal es disponer de una habitación aislada.
Las aparición de cabinas de flujo laminar redujo las necesidades de aislamiento del área de trabajo pero aún así es recomendable mantener un gradiente de esterilidad, desde el medio exterior o laboratorio general al interior de las cabinas de flujo donde se manipularán los cultivos y del incubador donde se mantendrán.
Además también se debe evitar
·         Humedad y temperaturas extremas.
·         Cambios bruscos de temperatura.
·         Corrientes de aire molestas.
ELEMENTOS DE PROTECCIÓN PERSONAL
ü  Uso de mascarilla y protectores oculares.
ü  Efectuar desinfección y limpieza en las áreas empleando las técnicas correctas y las diluciones adecuadas de los desinfectantes, de acuerdo a los Procedimientos básicos de limpieza y desinfección.
ü  Desinfectar las manos con alcohol de 96°.
ü  Prevenir lesiones que causan instrumentos punzo cortantes.

PRODUCCIÓN:
Mediante ésta técnica tendremos mayor producción de plantas en un espacio reducido y en menos tiempo.
Además se tiene mayor control sanitario del material propagado.

MERCADO:
La producción que obtendremos está destinada para los mercados de Sullana y Piura, los mismos que por su delicado cuidado son productos muy costosos, es ahí donde esta nuestra ventaja. Además con la entrada de nuevos mercados como es los grandes supermercados que están entrando en Piura, se nos abre una nueva ventana de comercialización para nuestro producto.

EQUIPOS HERRAMIENTAS Y MATERIALES.
EQUIPOS:
Ø  Refrigeradora
Ø  Destilador de agua
Ø  Cámara de flujo laminar
Ø  Equipo de aire acondicionado
Ø  Microscopio
Ø  Estereoscopio
Ø  Fluorescentes
Ø  Potenciómetro
Ø  Balanza de gramos
Ø  Cocina a gas
Ø   Balón de gas
Ø  Olla a presión
Ø  Chaqueta
Ø  Tapa boca
Ø  Stands

HERRAMIENTAS:
Ø  Pipeta 1 ml
Ø  Pipeta 5 ml
Ø  Pipeta 10 ml
Ø  Frascos de vidrio
Ø  Tubos de ensayo
Ø  Placas de petri
Ø  Mangos de bisturí
Ø  Laminas de bisturi
Ø  Fiolas de 250 ml
Ø  Probeta 250ml
Ø  Probeta 500ml
Ø  Vasos de precipitado 250 ml
Ø  Pinzas
Ø  Mechero
Ø  Gradillas
Ø  Bandejas

MATERIALES:
Ø  Medio de cultivo
Ø  Algodón
Ø  Cinta Graf
Ø  Ligas
Ø  Papel de aluminio
Ø  Alcohol de 96º
Ø  Lejía comercial
Ø  Agua destilada
Ø  Agua esterilizada


PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO:
HORTALIZAS
Rectángulo redondeado: FÓRMULA:
MS + Vitamina + ANA 0.1 mg/Lt + BAP 5 mg/L + Sacarosa 3%  + Agar 0.7%.


 



                                                


CÁLCULO DE COMPONENTES DEL M.C DE PAPA (PARA 1 LT.)
SALES
MS1               20 ml   
MS2                 1 ml
MS3                 1 ml
MS4                 3 ml
MS5                 5 ml
VITAMINAS
Tiamina         25 ml
Mastisol        12.5 ml
HORMONAS
ANA                 1 ml
BAP                  2.5 ml
Sacarosa        30 gr
AGAR               6 gr

DIAGRAMA DEL MÉTODO PARA PROPAGACIÓN DE ORNAMENTALES




Para iniciar con el proceso de propagación de plantas ornamentales (violetas - begonias) se trajeron partes de la hoja de dichas plantas.
La fase 1 de propagación dura aproximadamente 3 meses, se emplean partes de la hoja, y  requiere de 16 hrs. Diarias de luz y 8 de oscuridad y una T° DE 22-23°C.
ü  La fase 2 de propagación de esquejes para medios líquidos dura aproximadamente 3 semanas, se emplean las plántulas obtenidas en la primera fase, sin raíces ni ápice, las condiciones de iluminación y T° son las mismas que en la fase anterior por cada frasco obtenemos 4-5 plántulas.
ü  Para la tercera etapa que es la tuberización tenemos 2 opciones: cambiar de medio          (medio de tuberización) un medio fresco con CCC (500 ppm) + BAP (5ppm) + 8% sacarosa, o adicionar CCC, BAP y sacarosa al frasco con el medio de propagación original.

ü  Luego se deben transferir a un cuarto oscuro de incubación a 22°C durante 30 días.

PLAN DE PRODUCCIÓN:
LA VARIEDAD A PROPAGAR ES LA AMARILLIS POR SER LA MÁS CULTIVADA EN PIURA.
En la primera etapa que dura 2 meses sembraremos en 100 tubos de ensayo los nudos obtenidos de las plántulas in vitro proporcionadas por el CIP. De cada plántula obtenemos 5 micro nudos.
 De las 100 plántulas obtenidas en la primera fase destinamos 20 para seguir propagando por micro nudos y 80 para tuberización.
Estos 80 esquejes nos permitirán obtener 5 plántulas cada uno las cuales producirán 3 micronudos cada una, es decir en cuatro meses estaríamos obteniendo 1200 micro tubérculos listos para comercializar.


RECOMENDACIONES

De hecho, la micropropagación vegetal es una de las áreas biotecnológicas que deberían ser más explotadas para mejorar la productividad agrícola en nuestra región. Si esta técnica se instala en el sector agropecuario como una actividad de rutina, el aumento de la productividad agraria se asegurará.

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